猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒使用说明书
【简介】
试剂盒由抗原包被板,羊抗猪酶标二抗及其它试剂制成,应用间接ELISA检测猪血清中抗猪链球菌2型抗体。
【用途】
用于检测猪血清中猪链球菌2型抗体,适用于猪场猪链球菌2型疫苗免疫状况的评价以及感染猪的血清学诊断。
【原理】
本试剂盒是采用猪链球菌2型荚膜多糖抗原包被微孔板,在试验中,加入稀释的对照血清和待检血清,经温育后,若样品中含有抗猪链球菌2型的特异性抗体,则将与检测板上抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶结合物,在孔中加TMB底物液,与酶反 应形成蓝色产物,加入HF溶液终止反应后,用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。
【试剂盒主要成分】
1 抗原包被板 2块 (96孔/块)
2 阴性对照血清 (蓝色盖子) 1管 (1ml/管)
3 阳性对照血清 (红色盖子) 1管 (1ml/管)
4 羊抗猪酶标二抗(蓝色盖子) 1瓶 (20ml/瓶)
5 20倍浓缩洗涤液(白色盖子) 1瓶 (30ml/瓶)
6 底物液A (红色盖子) 1瓶 (10ml/瓶)
7 底物液B(黑色盖子) 1瓶 (10ml/瓶)
8 终止液 (蓝色盖子) 1瓶 (10ml/瓶)
9 样品稀释液 (黄色盖子) 1瓶 (50ml/瓶)
10 脱脂奶粉(白色盖子) 1管 (1 g /管)
11 血清稀释板 2块 (96孔/板)
12 说明书 1张
【样品制备】
取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。
【洗涤液配制】
使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(25℃左右),并摇动使沉淀的盐溶解(在37℃水中加热5~10分钟),然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释(例如:每板用20 ml浓缩液加上380ml水),稀释好的洗涤液在2~8℃可以存放7天。
【样品稀释液配制】
样品稀释液在使用前加入全部脱脂奶粉并混匀。
【样品和对照稀释】
样品稀释:在血清稀释板中按1:40的体积稀释待检血清样品(195μl样品稀释液中加5μl待检血清样品)。
对照稀释:在血清稀释板中按1:4分别稀释阳性对照和阴性对照(180μl样品稀释液中加60μl对照血清)。
【注意事项】
1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用后放回2~8℃。
2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
3 不要用口移液。
4 底物液B不要暴露于强光,避免接触氧化剂。
5 未使用的抗原包被板切记不要撕开上面的封口膜。
6 待检血清样品数量较多时,应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清,再将稀释好的血清转移到检测板,使反应时间一致。
7 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释,如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
8 严格按照操作说明书可以获得的结果。
【操作步骤】
1 取抗原包被板(根据样品多少,可拆开分次使用),每孔加入稀释好的洗涤液200μl,静置3分钟倒掉液体,并在吸水纸上拍干。再分别将稀释好的待检血清和对照各取100μl加入到抗原包被板孔中,待检样品做1孔,阴性对照和阳性对照各设2孔,每孔100μl.轻轻振匀孔中样品(勿溢出),置37℃温育30分钟。
2 甩掉板孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液200μl,静置3分钟倒掉,再在吸水纸上拍干,共计洗涤5次,
3 每孔加羊抗猪酶标二抗100μl,置37℃温育30分钟。
4 洗涤5次, 方法同2.切记每次在干净吸水纸上拍干。
5 每孔先加底物液A一滴(50?l)、再加底物液B一滴(50?l),混匀,室温(18℃~25℃)避光显色10分钟。
6 每孔加终止液一滴(50μl),10分钟内测定结果(测定前在震荡器上轻轻震动一下)。
【结果判定】 在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0.6,阴性对照孔平均OD630nm值必须<0.3.
样品OD630nm值≥0.35,判为阳性;样品OD630nm值<0.35,判为阴性。
【贮 存】 2-8℃避光保存
【有 效 期】 10个月
【生产企业】 武汉科前动物生物制品有限责任公司