产品描述
【兽药名称】
通用名 禽流感病毒H5亚型RT-PCR检测试剂盒
商品名 无
英文名 Avian Influenza Virus H5 Subtype RT-PCR Detection kit
汉语拼音 Qinliugan Bingdu H5yaxing RT-PCR Jianceshijihe
【主要成分与含量】
变性液6mL×1瓶、酚/氯仿/异戊醇混合液6mL×1瓶、异丙醇9mL×1瓶、75%乙醇10mL×2瓶、DEPC水500μl×1管、2mol/L醋酸钠溶液（pH值4.0）700μl×1管、阳性对照100μl×1管、阴性对照100μl×1管、RT-PCR反应体系22.5μl×22管、6倍上样缓冲液 100μl×1管、扩增对照30μl×1管。
【作用与用途】
用于H5亚型禽流感病毒的检测。适用于可能感染H5亚型禽流感病毒的咽喉拭子、泄殖腔拭子、组织、鸡胚尿囊液以及细胞培养物中H5亚型禽流感病毒RNA的检测。
【用法与判定】
1 取1.5mL DEPC处理过的离心管，加入待检样品100μl,加300μl变性液，继续加入30μl 2mol/L醋酸钠（pH值4.0）。反复颠倒离心管4~5次，以混合均匀。
2 加入酚/氯仿/异戊醇混合液300μl,反复颠倒离心管3~5次，再摇晃10秒，置冰上静置15分钟。
3 4℃ 12000r/min离心20分钟，吸取上清置另一个离心管中。
4 加入等体积的异丙醇，-20℃静置10~15分钟，沉淀RNA.
5 4℃ 12000r/min离心10分钟。弃上清，加入75%的冰乙醇，温和地反复颠倒离心管3~5次。
6 4℃ 12000r/min离心5分钟。弃上清，用滤纸吸干管壁余液，真空抽干或者37℃烘干5~20分钟。
7 加入10μl DEPC水，溶解RNA.
8 取2.5μl RNA转移到RT-PCR反应体系管中。
9 置于PCR仪中，循环参数为45℃逆转录45分钟，94℃ 预变性2分钟，94℃ 30秒、52℃ 45秒、68℃ 45秒，35个循环，68℃延伸8分钟。
10 取5μl PCR产物，混合1μl 上样缓冲液，1.0%的琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。以DNA分子量Marker为参考。
11 结果判定，同时出现372bp和229bp大小的扩增片段时，判定为H5血凝素亚型禽流感病毒阳性，只出现229bp片段判定为其它亚型A型流感病毒阳性，只出现372bp定为H5亚型疑似，不出条带，判定为阴性。
【注意事项】
（1）本试剂盒RNA提取液2~8℃存放；RT-PCR反应体系-20℃以下存放。尽量不要反复冻融。
（2）RT-PCR反应体系，用前要先在冰上彻底溶化，并瞬时离心将液体甩至管底。
（3）病料的处理很重要，现地采集的病料，先进行研磨，再按照每克重量加入1mL PBS,混匀，按10-1~10-2比例稀释后用于RNA的提取。棉拭子病料直接加入1mL PBS,混合后取溶液用于RNA的提取，不需要稀释。
（4）RNA的提取直接会影响到RT-PCR结果，需要特别注意RNA提取过程的操作。
（5）注意废弃物的无害化处理。可疑待检样品及其接触过器材要消毒灭菌，防止实验室散毒；含有EB的物品需要高温处理。
（6）注意防止PCR操作过程中的环境污染，有条件情况下可以采用独立房间分别进行RNA提取、RT-PCR、电泳等操作环节，无条件时应该尽可能划分不同功能的工作区，并且电泳时采用单独移液器。
【废弃包装处理措施】
剩余的试剂及空瓶不能随意丢弃，须经加热或消毒灭菌后方可废弃。
【规格】
20份/盒。
【贮藏与有效期】
RNA提取试剂置2~8℃保存；RT-PCR反应体系置-20℃以下保存。有效期6个月。
【批准文号】
兽药生字（2006）080018075
【生产企业】
哈尔滨维科生物技术开发公司
公司简介
哈尔滨维科生物技术有限公司（简称哈兽维科）成立于1992年，系农业科学院哈尔滨兽医研究所（简称哈兽研）独资的高新技术企业，注册资金一亿元人民币。公司从事动物疫苗、诊断制品的研发、生产、销售、技术咨询业务，重点是对哈兽研科技成果进行孵化、转化及孵化后的产品推广。
哈兽维科现有员工中具有大专以上学历人员超过75％，其中高级职称人员4人，副高级职称人员19人，具有博士、硕士以上学位人员77人。中高级职称人员中，绝大多数是哈兽研所获科技成果的参与完成人。
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