猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书
【简介】
试剂盒由抗原包被板，羊抗猪酶标二抗及其它试剂制成，应用间接ELISA检测猪血清中抗乙型脑炎病毒抗体。
【用途】
用于检测猪血清中乙型脑炎病毒抗体，适用于猪场乙型脑炎疫苗免疫状况的评价以及感染猪的血清学诊断。
【原理】
本试剂盒是采用猪乙型脑炎病毒纯化后包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有猪乙型脑炎病毒特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。
【试剂盒主要成分】
1 抗原包被板 2块 （96孔/块）
2 阴性对照血清 （蓝色盖子） 1管 （0.5ml/管）
3 阳性对照血清 （红色盖子） 1管 （0.5ml/管）
4 羊抗猪酶标二抗（蓝色盖子） 1瓶 （20ml/瓶）
5 20倍浓缩洗涤液（白色盖子） 1瓶 （30ml/瓶）
6 底物液A（红色盖子） 1瓶 （10ml/瓶）
7 底物液B（黑色盖子） 1瓶 （10ml/瓶）
8 终止液（蓝色盖子） 1瓶 （10ml/瓶）
9 样品稀释液（黄色盖子） 1瓶 （50ml/瓶）
10 血清稀释板 2块 （96孔/板）
11 说明书 1张
【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液配制】
使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（在37℃水中加热5~10分钟），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在2~8℃可以存放7天。
【样品和对照稀释】
样品稀释：在血清稀释板中按1:40的体积稀释待检血清样品（195μl样品稀释液中加5μl待检血清样品）。
对照稀释：在血清稀释板中按1:40分别稀释阳性对照和阴性对照（234μl样品稀释液中加6μl对照血清）。
【注意事项】
1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2~8℃。
2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3 不要用口移液。
4 底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。
5 未使用的抗原包被板切记不要撕开上面的封口膜。
6 待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。
7 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
8 严格按照操作说明书可以获得的结果。
【操作步骤】
1 取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），每孔加入稀释好的洗涤液200μl,静置3分钟倒掉液体，并在吸水纸上拍干。再分别将稀释好的待检血清和对照各取100μl加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl.轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。
2 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μl,静置3分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次，
3 每孔加羊抗猪酶标二抗100μl,置37℃温育30分钟。
4 洗涤5次， 方法同2.切记每次在干净吸水纸上拍干。
5 每孔先加底物液A一滴（50?l）、再加底物液B一滴（50?l），混匀，室温（18℃~25℃）避光显色10分钟。
6 每孔加终止液一滴（50μl），10分钟内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。
【结果判定】 在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值0.6,阴性对照孔平均OD630nm值必须<0.3.
样品OD630nm值≥0.32,判为阳性；样品OD630nm值<0.32,判为阴性。
注意：用620~650纳米波长测定结果均有效。
【贮 存】 2~8℃避光保存
【有 效 期】 10个月
【生产企业】 武汉科前动物生物制品有限责任公司